1.0所需設(shè)備

LAF
歧管支架組件
真空泵。
鉗
剪

2.0所需材料

樣品
無菌0.45µm膜過濾器
無菌FTM
無菌SCDM
無菌0.1％w / v蛋白ept水。
70％無菌IPA溶液。
燃氣燃燒器
無菌過濾組件
無菌SCDA板
無菌拭子

需要3.0實用程序

真空泵

4.0程序：

4.1膜過濾法

4.1.1成品樣品：按照SOP收集要測試的無菌樣品。從整個樣本中，隨機選擇LVP和SVP zui終滅菌產(chǎn)品以及無菌灌裝產(chǎn)品每批次20件（根據(jù)藥典）。
4.1.2中間體樣品：從LVP瓶裝機中隨機收集16個預(yù)先滅菌的瓶樣品進行無菌測試（更換新產(chǎn)品時，應(yīng)收集16個Ist批次瓶樣品），以使每個瓶均應(yīng)代表瓶子包裝機模具的每個型腔。
4.1.3用干凈的塑料箱將樣品轉(zhuǎn)移到質(zhì)量控制部門。
4.1.4用70％IPA溶液分別擦拭樣品并保存在標有產(chǎn)品名稱，批號和批號的干凈SS托盤中，然后通過干凈的傳遞箱將樣品轉(zhuǎn)移到無菌室進行滅菌。
4.1.5按照SOP準備培養(yǎng)基試管（FTM和SCDM），以制備培養(yǎng)基，將100-100 ml量的試管分配并塞緊。按照SOP的規(guī)定，在121ºC和15 psi的壓力下將培養(yǎng)基滅菌 20分鐘，以進行高壓滅菌。
4.1.6高壓滅菌后，在試管上貼上培養(yǎng)基名稱，培養(yǎng)基批號，并在適當?shù)臏囟认骂A(yù)孵育試管，即將SCDM試管在20至25ºC的溫度下進行孵育，而FT??GM試管在30至35ºC的溫度下進行24-48小時，然后對其進行處理。無菌操作。
4.1.7 按照SOP的規(guī)定，在121ºC溫度和15psi壓力下的不銹鋼容器中，高壓滅菌服，不銹鋼杯，插座單元，剪刀和鑷子放置30分鐘。
4.1.8滅菌后，冷卻內(nèi)容物，并在SS容器中無菌轉(zhuǎn)移到清潔的通行證盒中。
5.4.1.9將預(yù)孵育的無菌培養(yǎng)基試管，SCDA平板，無菌拭子，無菌歧管和0.1％w / v蛋白ept水通過通道箱轉(zhuǎn)移至無菌測試室。
4.1.10按照規(guī)定進入無菌室無菌室進出程序的SOP。
4.1.11按照SOP啟動LAF，以獲取LAF的操作說明。
4.1.12用70％IPA溶液擦去所有待測無菌樣品。
4.1.13在開始無菌測試之前，根據(jù)SOP在整個測試過程中將SCDA板暴露在指定位置。
4.1.14用管道將過濾歧管支架組件與SS儲罐正確連接，并將已消毒的SS杯放在層流氣流單元下方的無菌容器中。檢查工作LAF的壓力計讀數(shù)，并檢查無菌室的溫度和濕度
4.1.15 LAF腔室工作壓力的壓力計讀數(shù)應(yīng)在WG的08 – 15mm之間。無菌室的溫度讀數(shù)應(yīng)為27ºC±2ºC。
4.1.16開啟真空泵，但借助單個歧管支架底座上的真空控制鍵關(guān)閉歧管支架組件的真空。現(xiàn)在借助消毒鉗在濾杯和容器之間放置0.45m無菌濾膜。
4.1.17通過向過濾器支架中加入約15 ml無菌液體A（0.1％蛋白ept水）來潤濕濾膜，并通過真空過濾液體。
4.1.18用無菌SS刀片在燃氣燃燒器前切開瓶/小瓶或安瓿的**，立即將不少于LVP的內(nèi)容物和SVP小瓶的全部內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到膜上。
4.1.19立即在真空下過濾溶液，并用100 ml無菌液體A清洗膜三遍（如果注射用無菌水，則無需使用液體A清洗）。
4.1.20完全過濾后，借助歧管真空控制鍵停止歧管的真空。
4.1.21在無菌鑷子的幫助下小心地提起膜，用無菌SS剪刀無菌地將微孔濾膜切成兩半，并通過僅在燃氣燃燒器前拔下插頭，將一半轉(zhuǎn)移到FTM，另一半轉(zhuǎn)移到SCDM管。
4.1.22在兩個試管上貼上產(chǎn)品名稱B。編號，批號，測試日期，完成日期和測試依據(jù)。
4.1.23同時制備陰性對照，方法是過濾100 ml 0.1％蛋白％水而不是產(chǎn)品樣品，用無菌SS剪刀將膜切成兩半，將一半轉(zhuǎn)移到FTM，另一半轉(zhuǎn)移到SCDM，并將兩個管標記為負面控制。
4.1.24在無菌過程中同時準備一個腔室控制裝置，取兩支試管，一只為SCDM，另一支為FTM試管，拔出試管的棉塞，并在無菌過程中暴露在LAF中，無菌完成后重新插上試管，然后孵育管作為腔室控制。
4.1.25工作完成后，將所有接種的培養(yǎng)基通過培養(yǎng)箱轉(zhuǎn)移，然后將所有設(shè)備和裸露的平板轉(zhuǎn)移到微生物分析部分。
4.1.26立即按照無菌室進出程序中指定的SOP離開程序從無菌區(qū)移走。
4.1.27將FTM管在30ºC–35ºC下孵育，將SCDM管在20ºC–25ºC下孵育14天。
根據(jù)IP，zui終滅菌產(chǎn)品的培養(yǎng)期不少于7天，無菌填充產(chǎn)品的培養(yǎng)期不少于14天。如果產(chǎn)品符合USP，BP規(guī)定，zui終滅菌產(chǎn)品和無菌填充產(chǎn)品的孵育期均為14天。
4.1.28按照SOP啟動微生物分析室的LAF，并通過在FTM管中無菌接種10至100 cfu的金黃色葡萄球菌NCIM 2079，銅綠假單胞菌NCIM 2200，枯草芽孢桿菌NCIM 2063和環(huán)境菌群來準備四個陽性對照管EF-1.同樣地，通過分別用白色念珠菌NCIM 3471，黑曲霉NCIM 1196和環(huán)境菌群EF-2分別接種約10至100個細胞來制備三個SCDM陽性對照。2.在30 –35ºC下孵育FTM陽性對照管3天， SCDM陽性對照管在20 –25ºC的溫度下放置5天。

4.2結(jié)果的觀察和解釋

4.2.1每天目視檢查培養(yǎng)基試管以得出其結(jié)論，以得到微生物生長的宏觀證據(jù)。
4.2.2如果在任何試管中都沒有觀察到生長的跡象，則要進行測試的產(chǎn)品必須符合無菌測試。
4.2.3除非陰性對照在培養(yǎng)結(jié)束前顯示陰性，并且陽性對照在指定的培養(yǎng)期內(nèi)顯示出生長，否則測試無效。
4.2.4在確認FTM和SCDM管均生長后，銷毀所有陽性對照（通常會在24至48小時內(nèi)觀察到生長）。
4.2.5如果在任何試管中都發(fā)現(xiàn)了微生物生長的跡象，則按照SOP進行滅菌測試失敗調(diào)查，調(diào)查其失敗的原因。。如果調(diào)查報告認為測試無效，則以20個單位重復(fù)測試。
4.2.6如果在重復(fù)試驗中沒有發(fā)現(xiàn)生長的跡象，則所檢驗的產(chǎn)品符合無菌試驗。如果在重復(fù)測試中發(fā)現(xiàn)微生物生長的跡象，則所檢查的產(chǎn)品不符合無菌測試。
相關(guān)：倒置培養(yǎng)皿的培養(yǎng)

5.0注意事項

5.1樣品瓶/小瓶在移入無菌室之前以及在無菌操作之前，還應(yīng)先用已過濾的70％IPA擦拭干凈。艙口蓋也應(yīng)使用過濾的70％IPA溶液正確清潔。
5.2無菌操作中或無菌室內(nèi)所用的任何材料均應(yīng)進行高壓滅菌。
5.3在用無菌加熱切割刀片切割之前，應(yīng)在燃氣燃燒器前面適當加熱樣品瓶/小瓶的**。
5.4無菌操作后應(yīng)立即清潔廢液容器，并用無菌擦拭器用過濾的70％IPA擦拭容器的外表面。

6.0頻率

對于LVP –明智的選擇
對于SVP –明智的選擇

7.0縮寫

SOP：標準操作程序
IPA：異丙醇
SVP：小劑量腸胃外
藥物L(fēng)VP：大劑量腸胃外
藥物FTM：巰基
乙酸液體培養(yǎng)基SCDM：大豆酪蛋白消化培養(yǎng)基