微孔濾膜過濾除菌
一、實(shí)驗(yàn)意圖要求 (1)了解過濾除菌的原理。 (2)把握微孔濾膜過濾除菌的辦法。 二、基本原理
雖然有報(bào)道稱原核細(xì)菌小**納米(10-9m)級，大可達(dá)0．1～0．3mm乃**
0．75mm(非洲納米比亞球菌)，一些真核微生物如蘑菇、木耳等擔(dān)子菌也非常大。但jue大部分微生物都是微米級(10-6mm)，常用的微孔濾膜可以把jue大部分細(xì)菌別離開來。過濾除菌是依據(jù)微生物的巨細(xì)，如原核微生物的尺度為1～10μm(球菌0．5～2μm，桿菌長1～8μm、寬0．5～1μm，螺旋菌長5～50μm、寬0．5～5μm)，真核微生物的尺度為10～100μm(粗略地說，真核微生物和原核微生物巨細(xì)存在10：1的遞減規(guī)則)，挑選孔徑不同的濾膜，經(jīng)過機(jī)械效果濾去液體或氣體中微生物的辦法(圖1—2)。
這是一種非殺滅性除菌方法，實(shí)際上到達(dá)菌液別離的作用。詳細(xì)試驗(yàn)應(yīng)根據(jù)不同的需求選用不同的濾器和濾板資料。市面上常見的微孔濾膜有醋酸纖維酯和硝酸纖維酯濾膜等，孔徑有0．025μm、0．05μm、0．10μm、0．20μm、0．22μm、0．30μm、0．45μm、0．60μm、0．65μm、0．80μm、1．00μm、2．00μm、3．00μm、5．00μm、7．00μm、8．00μm和10．00μm等，試驗(yàn)室除菌用一般挑選0．22μm，但除病毒需挑選更小孔徑的濾膜。大濾板有石棉濾板、K型濾板(孔徑**大，作一般弄清用)、EK濾板(濾孔較小，用以去除一般細(xì)菌)、EK-S濾板(濾孔**小，可阻撓大病毒經(jīng)過)。
此法除菌的**大長處是能夠不損壞溶液中各種物質(zhì)的化學(xué)成分，適用于酶、朊、核酸、抗生素、病毒等活性分子的過濾，但由于濾量有限，所以一般只適用于試驗(yàn)室中小量溶液的過濾除菌。跟著反滲透技能的逐步老練和成本下降，大規(guī)模的過濾除菌工業(yè)使用也現(xiàn)已呈現(xiàn)：在礦泉水、純凈水出產(chǎn)制造過程中已有使用。
三、試驗(yàn)資料與設(shè)備 1．培養(yǎng)基
2％的葡萄糖溶液(葡萄糖試劑需滿意HG／T 3475 —1999《化學(xué)試劑葡萄糖》要求)、肉湯朊胨瓊脂培養(yǎng)基(平皿)、養(yǎng)分肉湯。
肉湯朊胨瓊脂培養(yǎng)基制造：朊胨10g，牛肉膏5g，NaCl 5g，蒸餾水1000mL，瓊脂16g，調(diào)理pH**7．2，分裝克氏瓶，每瓶150mL，121℃、20min滅菌，后平放成平板。養(yǎng)分肉湯類有YY／T1187—2010《養(yǎng)分肉湯培養(yǎng)基》可作參考，制造：朊胨10．0g，牛肉粉3．0g，NaCl 5．0g(質(zhì)量應(yīng)滿意GB／T 1266—2006《化學(xué)試劑氯化鈉》)，pH值7．2±0．2(25℃)，加熱溶解于1000mL蒸餾水中，分裝三角瓶或試管，121℃高壓滅菌15Dmin備用。
如無特別闡明，本書及附錄中所有藥品均為市售剖析純(AR)或生物化學(xué)純(BR)或以上純度等級試劑，蒸餾水為雙蒸水或去離子水，所有市售化學(xué)藥品應(yīng)滿意有關(guān)G家法律法規(guī)、規(guī)范和／或技能規(guī)范等。我G現(xiàn)已擬定施行的化學(xué)試劑規(guī)范有280多條，如GB／T1266—2006《化學(xué)試劑氯化鈉》等，為了便利閱覽，在本書相應(yīng)初次提及的當(dāng)?shù)兀甲髁颂崾尽?nbsp;
2．儀器或其他用具
注射器、微孔濾膜過濾器、0．22μm／0．45μm濾膜、無菌試管、鑷子、玻璃刮棒、真空泵或水泵、砂芯過濾設(shè)備。有關(guān)設(shè)備**少應(yīng)滿意GB／T u415 89《實(shí)驗(yàn)室燒結(jié)(多孔)過濾器孔徑、分級和商標(biāo)》等的要求。
四、操作過程 1．很多液體過濾除菌
將0．22μm孔徑的濾膜裝入清洗潔凈的砂芯過濾設(shè)備中，旋緊或稍真空抽濾，壓平(如用一次性預(yù)滅菌的帶膜針式濾頭則無此過程)，包裝滅菌(0．1MPa、121．5℃滅菌20min)后待用。
2．針孔過濾器
將滅菌濾器的進(jìn)口在無菌條件下以無菌操作方法銜接于裝有待濾溶液(2％葡萄糖溶液)的注射器上，將針頭與出口處銜接并刺進(jìn)帶橡皮塞的無菌容器中(圖1一3)。 3．壓濾
將注射器中的待濾溶液加壓緩緩擠入過濾到無菌試管中，濾畢將針頭拔出。 注意：壓濾時(shí)，用力要適中，不可太猛、太快，以免細(xì)菌被擠壓通過濾膜。 4．無菌檢查以無菌操作吸取除菌濾液0．1mL或許直接將濾膜培育于朊胨瓊脂平板上，涂布均勻，置37℃溫室中培育24h，查看是否有菌成長。
5．清洗
棄去砂芯過濾設(shè)備上的微孔濾膜，將砂芯過濾設(shè)備清洗潔凈，并換上一張新的微孔濾膜組裝包扎，再經(jīng)滅菌后使用。
注意：整個(gè)進(jìn)程應(yīng)在無茵條件下嚴(yán)厲無茵操作，以防污染。過濾時(shí)應(yīng)防止各連接處呈現(xiàn)滲透現(xiàn)象。
歸納比較上述**部分到第五部分介紹的消毒、殺菌和除菌辦法，可見各有各的特色、用途和規(guī)模，具體和特定條件下選用哪種辦法，應(yīng)歸納起來考慮。除經(jīng)濟(jì)考慮外，針對原料和環(huán)境要素，比較各類辦法(表1—3)，以供參閱。
雖然有報(bào)道稱原核細(xì)菌小**納米(10-9m)級，大可達(dá)0．1～0．3mm乃**
0．75mm(非洲納米比亞球菌)，一些真核微生物如蘑菇、木耳等擔(dān)子菌也非常大。但jue大部分微生物都是微米級(10-6mm)，常用的微孔濾膜可以把jue大部分細(xì)菌別離開來。過濾除菌是依據(jù)微生物的巨細(xì)，如原核微生物的尺度為1～10μm(球菌0．5～2μm，桿菌長1～8μm、寬0．5～1μm，螺旋菌長5～50μm、寬0．5～5μm)，真核微生物的尺度為10～100μm(粗略地說，真核微生物和原核微生物巨細(xì)存在10：1的遞減規(guī)則)，挑選孔徑不同的濾膜，經(jīng)過機(jī)械效果濾去液體或氣體中微生物的辦法(圖1—2)。
這是一種非殺滅性除菌方法，實(shí)際上到達(dá)菌液別離的作用。詳細(xì)試驗(yàn)應(yīng)根據(jù)不同的需求選用不同的濾器和濾板資料。市面上常見的微孔濾膜有醋酸纖維酯和硝酸纖維酯濾膜等，孔徑有0．025μm、0．05μm、0．10μm、0．20μm、0．22μm、0．30μm、0．45μm、0．60μm、0．65μm、0．80μm、1．00μm、2．00μm、3．00μm、5．00μm、7．00μm、8．00μm和10．00μm等，試驗(yàn)室除菌用一般挑選0．22μm，但除病毒需挑選更小孔徑的濾膜。大濾板有石棉濾板、K型濾板(孔徑**大，作一般弄清用)、EK濾板(濾孔較小，用以去除一般細(xì)菌)、EK-S濾板(濾孔**小，可阻撓大病毒經(jīng)過)。
此法除菌的**大長處是能夠不損壞溶液中各種物質(zhì)的化學(xué)成分，適用于酶、朊、核酸、抗生素、病毒等活性分子的過濾，但由于濾量有限，所以一般只適用于試驗(yàn)室中小量溶液的過濾除菌。跟著反滲透技能的逐步老練和成本下降，大規(guī)模的過濾除菌工業(yè)使用也現(xiàn)已呈現(xiàn)：在礦泉水、純凈水出產(chǎn)制造過程中已有使用。
三、試驗(yàn)資料與設(shè)備 1．培養(yǎng)基
2％的葡萄糖溶液(葡萄糖試劑需滿意HG／T 3475 —1999《化學(xué)試劑葡萄糖》要求)、肉湯朊胨瓊脂培養(yǎng)基(平皿)、養(yǎng)分肉湯。
肉湯朊胨瓊脂培養(yǎng)基制造：朊胨10g，牛肉膏5g，NaCl 5g，蒸餾水1000mL，瓊脂16g，調(diào)理pH**7．2，分裝克氏瓶，每瓶150mL，121℃、20min滅菌，后平放成平板。養(yǎng)分肉湯類有YY／T1187—2010《養(yǎng)分肉湯培養(yǎng)基》可作參考，制造：朊胨10．0g，牛肉粉3．0g，NaCl 5．0g(質(zhì)量應(yīng)滿意GB／T 1266—2006《化學(xué)試劑氯化鈉》)，pH值7．2±0．2(25℃)，加熱溶解于1000mL蒸餾水中，分裝三角瓶或試管，121℃高壓滅菌15Dmin備用。
如無特別闡明，本書及附錄中所有藥品均為市售剖析純(AR)或生物化學(xué)純(BR)或以上純度等級試劑，蒸餾水為雙蒸水或去離子水，所有市售化學(xué)藥品應(yīng)滿意有關(guān)G家法律法規(guī)、規(guī)范和／或技能規(guī)范等。我G現(xiàn)已擬定施行的化學(xué)試劑規(guī)范有280多條，如GB／T1266—2006《化學(xué)試劑氯化鈉》等，為了便利閱覽，在本書相應(yīng)初次提及的當(dāng)?shù)兀甲髁颂崾尽?nbsp;
2．儀器或其他用具
注射器、微孔濾膜過濾器、0．22μm／0．45μm濾膜、無菌試管、鑷子、玻璃刮棒、真空泵或水泵、砂芯過濾設(shè)備。有關(guān)設(shè)備**少應(yīng)滿意GB／T u415 89《實(shí)驗(yàn)室燒結(jié)(多孔)過濾器孔徑、分級和商標(biāo)》等的要求。
四、操作過程 1．很多液體過濾除菌
將0．22μm孔徑的濾膜裝入清洗潔凈的砂芯過濾設(shè)備中，旋緊或稍真空抽濾，壓平(如用一次性預(yù)滅菌的帶膜針式濾頭則無此過程)，包裝滅菌(0．1MPa、121．5℃滅菌20min)后待用。
2．針孔過濾器
將滅菌濾器的進(jìn)口在無菌條件下以無菌操作方法銜接于裝有待濾溶液(2％葡萄糖溶液)的注射器上，將針頭與出口處銜接并刺進(jìn)帶橡皮塞的無菌容器中(圖1一3)。 3．壓濾
將注射器中的待濾溶液加壓緩緩擠入過濾到無菌試管中，濾畢將針頭拔出。 注意：壓濾時(shí)，用力要適中，不可太猛、太快，以免細(xì)菌被擠壓通過濾膜。 4．無菌檢查以無菌操作吸取除菌濾液0．1mL或許直接將濾膜培育于朊胨瓊脂平板上，涂布均勻，置37℃溫室中培育24h，查看是否有菌成長。
5．清洗
棄去砂芯過濾設(shè)備上的微孔濾膜，將砂芯過濾設(shè)備清洗潔凈，并換上一張新的微孔濾膜組裝包扎，再經(jīng)滅菌后使用。
注意：整個(gè)進(jìn)程應(yīng)在無茵條件下嚴(yán)厲無茵操作，以防污染。過濾時(shí)應(yīng)防止各連接處呈現(xiàn)滲透現(xiàn)象。
歸納比較上述**部分到第五部分介紹的消毒、殺菌和除菌辦法，可見各有各的特色、用途和規(guī)模，具體和特定條件下選用哪種辦法，應(yīng)歸納起來考慮。除經(jīng)濟(jì)考慮外，針對原料和環(huán)境要素，比較各類辦法(表1—3)，以供參閱。
